متن کامل خبر


 
جلسه دفاع از رساله: خانم شیما مسعودی اصیل، گروه شیلات تکثیرو پرورش

خلاصه خبر: اثر سطوح مختلف اسيد آراشيدونيک بر کارايي توليد مثل، فعاليت و بيان ژن آنزيم سيتوکروم p-450 و بيان گيرنده گنادوتروپين نوع دو (LH) در ماهی گورامی آبی (Trichopodus trichopterus) .

  • عنوان: اثر سطوح مختلف اسيد آراشيدونيک بر کارايي توليد مثل، فعاليت و بيان ژن آنزيم سيتوکروم p-450 و بيان گيرنده گنادوتروپين نوع دو (LH) در ماهی گورامی آبی (Trichopodus trichopterus) .
  • ارائه‌کننده: خانم شیما مسعودی اصیل
  • استاد راهنما: دکتر عبدالمحمد عابدیان
  • استاد ناظر داخلی اول: دکتر محمدرضا کلباسی
  • استاد ناظر داخلی دوم: دکتر مسعود رضایی
  • استاد ناظر خارجی اول: دکتر بهرام فلاحتکار
  • استاد ناظر خارجی دوم: دکترباقر مجازی امیری
  • استاد مشاور اول: دکترقدرت الله رحیمی میانجی
  • استاد مشاور دوم: دکتر گلن ون درکرک
  • نماینده تحصیلات تکمیلی: دکتر امیر حسین اسماعیلی
  • مکان: سالن دفاع علوم دریایی
  • تاریخ: 13/10/96
  • ساعت: 10

چکیده چکیده در مطالعه حاضر اثر سطوح مختلف اسید آراشیدونیک بر شاخص¬های رشد، کارآیی تولیدمثل، فعالیت و بیان ژن آنزیم سیتوکروم P-450و ژن گیرنده LHدر مولدین ماهی گورامی آبی (Trichopodustrichopterus) به صورت درون تنی و همچنین تغییرات سطوح هورمون¬های استروئیدی و فعالیت آنزیم سیتوکروم P-450 آروماتاز در شرایط برون تنی بررسی شد. آزمایش درون تنی شامل 5 تیمار ( 02/0 (کنترل)، 53/0، 05/1، 6/1 و 12/2 درصد اسید آراشیدونیک در جیره)؛ با 6 تکرار (آکواریوم) در هر تیمار، 25 ماهی در هر تکرار و در مجموع 150 ماهی در هر تیمار بود. آزمایش برون تنی نیز شامل تیمارهای کنترل، 1 درصد روغن آفتابگردان، 1 و 2 درصد روغن آراشیدونیک و 4 تکرار در هر تیمار بود. ماهیان ماده از سن یک ماهگی به مدت 5 ماه تا رسیدن به مرحله بلوغ با جیره¬های آزمایشی تغذیه شدند. پس از پایان مراحل زرده سازی و رسیدگی نهایی نمونه برداری جهت سنجش شاخص¬های مختلف رشد و تکثیر انجام شد. نتایج آزمایش درون تنی نشان داد که هیچ یک از شاخص¬های رشد و تغذیه-ای تحت تأثیر سطوح اسید آراشیدونیک جیره نبودند. کارآیی تولیدمثل شامل شاخص گنادوسوماتیک، هم¬آوری مطلق و نسبی، میزان تخم گشایی و زنده¬مانی لاروی با افزایش سطوح آراشیدونیک جیره (6/1 و 12/2 درصد) بهبود معناداری داشت. بیشترین میزان هم¬آوری مطلق (32/13×103) و نسبی (33/974) در تیمار 12/2 درصد و بالاترین درصد تخم¬گشایی (10/84 درصد) و زنده¬مانی لاروی (5/68 درصد) در جیره 6/1 درصد آراشیدونیکبدست آمد. سطح هورمون استرادیول پلاسما با افزایش سطوح آراشیدونیک جیره بطور معناداری افزایش یافت. در شرایط برون تنی نیز روغن آراشیدونیک نسبت به روغن آفتابگردان باعث افزایش معنادار سطح استرادیول تولیدی در محیط کشت شد. سطح هورمون DHP-β20-α17 در شرایط درون تنی تا سطح 05/1 ARA(55/0 نانوگرم/میلی¬لیتر) افزایش و سپس کاهش یافت، درحالی¬که در آزمایش برون تنی در تیمار حاوی غلظت بالای آراشیدونیک (2 درصد)، میزان این هورمون (13/35 نانوگرم/میلی¬لیتر) افزایش معناداری داشت. فعالیت آنزیم سیتوکروم P-450آروماتاز در شرایط درون تنی با افزایش سطح آراشیدونیک تا 05/1 درصد افزایش (65/124 پیکومول/میلی¬گرم پروتئین) و پس از آن کاهش یافت. در شرایط برون تنی فعالیت نسبی آنزیمسیتوکروم P-450 آروماتاز در تیمارهای 2 و 1 درصد آراشیدونیک نسبت به تیمار کنترل به ترتیب 58/3 و 55/1 برابر افزایش یافت. بیشترین بیان نسبی ژن آنزیم سیتوکروم P-450 (37/3) (نسبت به ژن مرجع s18) در تیمار 12/2 درصد آراشیدونیک در جیره بود. با افزایش میزان آراشیدونیک در جیره¬های آزمایشی، سطح هورمون T4 در پلاسمای مولدین کاهش و میزان هورمون T3افزایش یافت. سطوح ویتلوژنین، کلسیم و کلسترول پلاسما نیز در تیمارهای حاوی آراشیدونیک نسبت به تیمار کنترل بیشتر بودند. مطالعات بافت شناسی نشان داد تغذیه با سطح بالای آراشیدونیک (12/2) سبب پیشرفت معنادار رسیدگی تخمدان در مرحله زرده سازی شد. با افزایش سطح آراشیدونیک تا میزان 6/1 درصد، میزان بیان نسبی گیرنده LHبه¬صورت معناداری افزایش (87/2) و پس از آن کاهش یافت. روند افزایشی هورمون¬های استروییدی و فعالیت آنزیم سیتوکروم P-450 آروماتاز تا یک سطح مشخص از اسید آراشیدونیک در هر دو شرایط درون تنی (05/1 درصد) و برون تنی (2 درصد)، حاکی از ارتباط مثبت و مستقیم این دو شرایط با یکدیگر و مویدی بر تاثیر مثبت و معنادار اسید آراشیدونیک جیره بر فعالیت¬های تولیدمثلی این گونه می¬باشد. با توجه به مجموع نتایج، استفاده از حداقل 05/1 درصد اسید آراشیدونیک در جیره¬ی پیش مولدین گونه گورامی آبی باعث بهبود کارآیی تکثیر و عملکرد سیستم درون ریز تولیدمثلی شده و جهت افزایش شاخص¬های کیفی تخم و لارو، کاربرد 12/2 و یا 6/1درصد آراشیدونیک در جیره مولدین این گونه پیشنهاد می¬شود. در شرایط برون تنی نیز غلظت 2 درصد آراشیدونیک در محیط کشت باعث افزایش معنادار القای تولید هورمون¬های استروئیدی و فعالیت آنزیم سیتوکروم P-450 آروماتاز خواهد شدکه مؤید تاثیر اسید آراشیدونیک بر شاخص¬های تولیدمثلی می باشد.
Abstract In the current study the effects of different arachidonic acid (ARA) levels on growth, reproductive performance, activity and expression of and cytochrome P-450 gene (Cyt P-450), expression ofLH receptor gene (in vivo); and on steroid hormone production and Cyt P-450 activity (in vitro) were investigated in blue gourami (Trichopodustrichopterus) broodstock. The in vivo experiments included five treatments(containing 0.02 (control), 0.53, 1.05, 1.6 and 2.12% ARA (of diet); with 6 triplicate (aquariums) in each treatment, 25 fish in each triplicate and totally 150 fish in each treatment .The in vitroexperiment contained four treatments including control; 1% sun flower oil, 1 and 2% arachidonic acid oil, with 4 triplicates in each treatment. One month old female fish were fed with experimental diets for a five month period as the fish reached maturity. After completion of vitellogenesis and final maturation, broodstock were randomly sampled for measuring growth and reproductive parameters. Results of in vivo experiments showed that growth and nutritional parameters were not affected by dietary ARA levels. Increasing ARA levels caused significant improvement of reproductive indices such as gonadosomatic index, absolute and relative fecundity, hatching rate and larval survival. The highest absolute (13.32×103) and relative (974.33) fecundity were recorded in 2.12% and maximum hatching rate (84.10%) and larval survival (68.5%) were found in 1.6% dietary ARA. The estradiol (E2) level significantly increased by elevating dietary ARA (in vivo), the E2 concentration also increased in ARA-contain compare to sunflower oil treatment (in vitro). The concentration of 17α20β dihydroxy progesterone (17α20β-DHP) increased by elevating ARA levels up to 1.05% (0.55ng/ml) and then decreased (in vivo), while it reached the highest level (35.13ng/ml) in high ARA concentration (2%) in the culture medium (in vitro). The maximum aromatase enzyme activity (124.65 pmol/mg protein) was recorded in 1.05% dietary ARA and then decreased (in vivo). The relative activity of aromatase enzyme in 1 and 2% ARA treatments significantly enhanced up to 3.58 and 1.58-fold, respectively; in comparison with control treatment (in vitro). The highest relative expression of Cyt P-450 enzyme (3.37) (in relation to reference gene 18s) obtained in 2.12% dietary ARA treatment. T3 level in the plasma of broodstock increased in higher ARA treatments (1.6 and 2.12%), but T4 level had a decreasing trend by increasing ARA levels. The vitellogenin, calcium and cholesterol contents of plasma were significantly higher in ARA-contain diets compared to control diet. Histological experiments showed that feeding with high dietary ARA (2.12%) caused significant improvement of ovary maturation in vitellogenesis stage. The LH receptor expression had a significantly increasing trend up to 1.6% dietary ARA (2.87 fold in relation to 18s) and then decreased. The increasing trend of steroidal hormones and CYP-450 aromatase activity by increasing ARA levels in both in vivo (up to 1.05% ARA) and in vitro experiments (2% ARA), reveals positive correlation between these conditions. These findings also confirm the significant effect of dietary ARA on reproductive performance in this species. In conlusion, the results of in vivo section suggest that inclusion of at least 1.05% ARA in pre-maturation diet of broodstock will improve reproductive performance and function of endocrine system of blue gourami; and inclusion of 2.12 or 1.6% ARA will enhance egg and larval quality in this species. Results of in vitro experiments suggest that 2% ARA in the culture medium will cause significant enhancement of steroid production and CYP-450 aromatase enzyme activity which confirms the positive effects of ARA on improvement ofreproductive performance.

کلمات کلیدی گورامی آبی،اسید آراشیدونیک، رشد، تولیدمثل، هورمون¬های استروئیدی، هورمون های تیروئیدی، فعالیت آنزیم سیتوکروم P-450آروماتاز، بیان ژن گیرنده LH

Blue gourami, arachidonic acid, growth, reproduction, steroid hormones, thyroid hormones, aromatase enzyme activity, LH receptor expression


10 دی 1396 / تعداد نمایش : 3063